○生命化学実験ＩＩＩ（Experiments of Chemistry and Life Science III）[3H19]

＜学位授与の方針＞

◎	1. 基礎知識の習得
○	2. 専門分野知識の習得
○	3. 汎用的問題解決技能
	4. 道徳的態度と社会性

＜授業のねらい＞

物質を認識するタンパク質（酵素や輸送体など）は生体内で様々な役割をもち，ネットワークを築いている．本実験では，タンパク質の構造や基本的な性質を学び，その機能（酵素活性，物質輸送，センシングなど）を理解するために，タンパク質を分離・精製し，分光学的および電気化学的に機能を評価する．

＜受講にあたっての前提条件＞

生命化学基礎実験，生化学実験，生命分析化学実験等を受講していることを望む．

＜具体的な到達目標＞

●タンパク質を扱う実験方法の理解とその進め方，および結果の解釈方法を身に付ける．
●測定機器の測定原理を理解し，操作方法を修得する．

＜授業計画及び準備学習＞

1. 遺伝子操作（アガロースゲル電気泳動法）
酵素遺伝子が挿入されたプラスミドDNAを，種々の制限酵素で処理し，アガロース電気泳動法で検証する．
2. タンパク質の精製 （クロマトグラフィー法）
大腸菌で発現した組換え酵素を，アフィニティクロマトグラフィーにより精製する．各画分の紫外吸収結果を基に，タンパク質濃度を測定，算出する．
3. 酵素活性測定と精製の検証（SDS-ポリアクリルアミドゲル電気泳動法）
アフィニティクロマトグラフィーにより得られた精製画分の酵素活性を測定する．タンパク質濃度および酵素活性の結果を基に，比活性，収率，そして精製度を算出する．また，その精製度をSDS-ポリアクリルアミドゲル電気泳動法で視覚的に検証する．
4. 酵素反応を利用した糖質量測定（紫外・可視分光法）
グルコースオキシダーゼとペルオキシダーゼの共役反応を利用し，グルコース濃度を紫外・可視分光光度計で定量し，酵素の基質選択性について評価する．
5. グルコースセンサの作製およびその性能評価（電気化学測定法）
グルコースオキシダーゼとフェロセン修飾ポリイオンを用いて交互積層法によりグルコースセンサを作製する．そのバイオセンサの性能を電気化学的に評価し，電子メディエータの役割について考察する．
6. 糖輸送体によるグルコースの細胞内への取り込み評価（蛍光分光法）
蛍光ラベルグルコースを用い，グルコースの細胞内への取り込みを蛍光分光光度計で測定し，糖輸送体の機能について検討する．
7. 学習内容の振り返り

＜成績評価方法＞

出席は全出席でレポートも全提出を原則とする。授業回数の1/3以上の欠席をした者は未履修とし，レポート未提出の者は単位を認定しない．A+〜Fの6段階評価でD以上の者を合格とする．

＜教科書＞

「生命化学実験」工学院大学先進工学部生命化学科編

＜参考書＞

「指定参考書なし」

＜オフィスアワー＞

小山：水曜日12時から13時，20階2068室
坂口：水曜日12時から13時，20階2068室
油井：水曜日12時から13時，20階2065室
急な用事で在室していないこともあります．事前にメールなどで連絡してください．

＜学生へのメッセージ＞

実験にあたっては，テキストに書いてある通り機械的に実験してレポートを書くというのではなく，記述されている実験の内容について，自分で必要な試料・器具・手順を考えて，問題点がないかどうかを確認したのち，実験ノートに記入し，当日の実験に備えることが必要である．また実験における諸注意を守り，事故を起こさぬように注意しなければならない．危険性のある試薬等を扱う場合は安全メガネ（またはメガネ）をかけることが必要である．